A4: Reference standards and reagents Team members: In scope - - PowerPoint PPT Presentation

A4: Reference standards and reagents

Team ¡members: ¡

Team lead

• Joseph Bower – NA - Joseph.Bower@covance.com

Other members

• Andrew Warren – EU –

andrew_paul.warren@novartis.com

• Carl Watson – EU – Carl.Watson@pfizer.com
• Jennifer McClung – NA – Jennifer.McClung@ppdi.com
• Kathy Wright – NA – kathryn.f.wright@pfizer.com
• Katia Pastre – LA- Katia.Pastre@magabi.com.br
• Mónica Cedrés Ercoli – LA - mcedres@bdbeq.com.uy
• Takahiko Osumi – APAC - osumit@otsuka.jp

In scope

• Recommendations for content in Certificate of

Analysis (COA) or equivalent documentation to be included with material if COA is not available for:

• Reference Standards
• (small and large molecules)
• Biomarkers
• Metabolites
• Internal Standards
• Recommendations for preparation of:
• Calibration standards and QCs.
• Stock solutions
• Internal standards

¡

Out ¡of ¡scope ¡

. Positive controls for Immunogenicity Assays . Bridging between lots of reference standards

¡

¡ ¡

Interdependencies ¡with ¡other ¡teams ¡– ¡if ¡any ¡

¡

– L4 ¡ ¡-­‑ ¡Reagents ¡and ¡their ¡stability ¡– ¡Lindsay ¡King ¡ – A11 ¡– ¡Biomarkers ¡– ¡Russ ¡Weiner ¡

¡

¡ ¡

1 ¡

• Reviewed ¡all ¡of ¡the ¡relevant ¡regulatory ¡guidance ¡and ¡industry ¡white ¡papers ¡related ¡

to ¡the ¡content ¡in ¡the ¡COA ¡or ¡equivalent ¡documentaEon ¡to ¡be ¡included ¡for ¡ reference ¡standards, ¡metabolites ¡and ¡internal ¡standards, ¡as ¡well ¡as ¡for ¡the ¡ preparaEon ¡of ¡calibraEon ¡standards ¡and ¡QCs, ¡stock ¡soluEons ¡and ¡internal ¡standards ¡

• ¡From ¡the ¡above, ¡our ¡team ¡has ¡generated ¡recommendaEons ¡for ¡each ¡and ¡has ¡begun ¡

to ¡circulate ¡to ¡colleagues ¡to ¡obtain ¡feedback ¡: ¡

– ¡ ¡The ¡content ¡in ¡the ¡COA ¡or ¡appropriate ¡documentaEon ¡to ¡be ¡included ¡for ¡ ¡reference ¡standards, ¡metabolites ¡and ¡internal ¡standards. ¡ – ¡ ¡ ¡The ¡preparaEon ¡of ¡calibraEon ¡standards ¡and ¡QCs, ¡stock ¡soluEons, ¡ ¡metabolites ¡and ¡ ¡internal ¡standards ¡

Approach

Team ¡A4 ¡Recommenda<ons ¡ Reference ¡Standards ¡ ¡ ¡

All reference standards (including certified reference standards or stocks, commercially supplied reference standards, or other materials of documented purity) should be provided with a COA, or equivalent documentation, that includes the following information:

• Lot# / Batch#
• Manufacturer
• Purity “for use as is” or correction factor *
• Expiration date (retest date)
• Storage Conditions, noting any special handling requirements #

* Stated correction factor by purity or protein/peptide content Chemical structure and formula (with salt form, water content, solvent content) # Light sensitivity etc..

Team ¡A4 ¡Recommenda<ons ¡ ¡Reference ¡Standards ¡cont. ¡

Large Molecules Reference material used for preparation of calibrators and QCs should be of the highest purity available and from the same batch and manufacturing process as that being dosed for non-clinical and clinical studies. If reference material is provided in a buffer or solution, the information on the COA should be relative to the reference standard in solution. Any special handling requirements (such as Freeze Thaw stability etc..) should also be noted. Biomarkers These reference standards are typically not well-characterized and prone to lot-to-lot

• variability. It is desirable to use a reference standard from a single lot throughout a study.

If it is not possible to use a single lot, appropriate bridging procedures are to be followed. The same process should be applied to kit assays.

Team ¡A4 ¡Recommenda<ons ¡ Metabolites ¡

Recommend that when a metabolite is being quantitated in the analytical method as a primary endpoint, the metabolite is treated similarly to reference standards. While a COA is not required, appropriate documentation should be provided which states

• Lot# / Batch#
• Manufacturer
• Purity / identity
• Expiration date
• Storage Conditions

In addition, it should be noted and documented that cross-reactivity and the possibility

• f back-conversation of the metabolite to parent have been evaluated.

** Note not addressed is Early Metabolite Discovery

Team ¡A4 ¡Recommenda<ons ¡ Internal ¡Standard

If available, a COA or other appropriate documentation, should be provided stating:

• Lot# / Batch#
• Manufacturer
• Purity / identity
• Storage Conditions
• Chemical formula with label

It should be noted that a lack of analytical interference and known impurities have been evaluated

Team ¡A4 ¡Recommenda<ons ¡ Prepara<on ¡of ¡calibra<on ¡standards ¡& ¡QCs ¡ ¡

A calibration curve should be prepared for each analyte in the sample and prepared in the same biological matrix as sample for intended study. A single source of matrix may also be used for preparation of calibrators and QCs, provided selectivity has been verified. Calibrators and QC samples should be prepared from a stock solution with proven solution stability and where accuracy have been verified. During preparation of calibrators, solution should not be diluted by more than 5%; meaning that >95% matrix should be maintained. In the case of rare matrix; altered/surrogate matrix may be used if equivalency is demonstrated during assay validation. If endogenous analytes are present – assay buffer may be used for preparation of calibrators. Altered or surrogates matrix should only be used if equivalency is demonstrated between surrogate matrix and authentic matrix. (this may be achieved by spiking reference standard or immune depleting the endogenous analyte if the levels are too high) If altered/surrogate matrix is used, QC samples should be prepared in authentic matrix. Stability should be assessed against freshly-spiked calibration curve and compared to nominal concentrations.

Team ¡A4 ¡Recommenda<ons ¡ ¡Prepara<on ¡of ¡stock ¡solu<ons ¡

During Validation, two separate weighing are required to balance stock solutions. When preparing stock solutions, the accuracy of stock solutions should be demonstrated by balancing stock solutions with defined acceptance between separate preparations. During sample analysis, a single verified stock solution may be used. If using working solutions, stability should be assessed by the lowest and highest concentrations of solutions. If a stock solution is prepared from a reference standard within its expiration date, there is no need to prepare a new stock solution when reference expires. Stability of the stock solution should be demonstrated with an appropriate solvent at known concentrations and at appropriate dilution. Stability at room temperature for at least 6 hours should be evaluated. If instability is observed at room temperature, then stability at alternate temperatures should be evaluated.

Team ¡A4 ¡Recommenda<ons ¡ ¡Prepara<on ¡of ¡Internal ¡Standards ¡ ¡

When possible, stability such as room temperature for at least 6 hours and refrigerated or frozen stability should be evaluated . If using rare IS and formal stability is not possible, stability should be documented through suitability of use (eg lack of interference and appropriate assay controls). ** Note not addressed are different types of IS. Comments are general as assumed this was covered in other team.

Next steps

• Review and incorporate feedback from this meeting and

adjust content accordingly.

• Look for future opportunities to present our

recommendations at future GBC focused meetings.

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