Workshop on Nanomaterial Drug Products January 14, 2014 - PowerPoint PPT Presentation

¡ ¡ CytImmune ¡Nanomedicine ¡Pla2orm: ¡ Manufacturing ¡and ¡Characteriza:on ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ Workshop ¡on ¡Nanomaterial ¡Drug ¡Products ¡ January ¡14, ¡2014 ¡ ¡ ¡ ¡ ¡

Producing ¡Nanomedicines ¡for ¡Clinical ¡Study ¡ From Bench… …to Bedside 2 ¡

CytImmune’s ¡Colloidal ¡Gold ¡Nanopar:cle ¡Synthesis ¡ Gold ¡ ¡ Chloride + Sodium ¡ ¡ Citrate Au 3+ ¡ Au 0 3 ¡

Reproducibility ¡of ¡Par:cle ¡Synthesis 4 ¡

Making ¡Gold ¡Nanopar:cles ¡Under ¡cGMP ¡ Adjusting Reaction Volume Rapid Addition of Sodium Citrate Release Valve 5 ¡

cGMP ¡Produc:on ¡of ¡CYT-­‑6091 1. Vessel Preparation 2. Binding 3. Formulated CYT-6091 cAu TNF & PEG-Thiol 4. Concentration by 5. Bulk Final Product 6. Lyophilization Ultrafiltration Dilute Concentrated CYT-6091 CYT-6091 6 ¡

Freeze-­‑dried, ¡cGMP ¡CYT-­‑6091 ¡for ¡Clinical ¡Study ¡ Current ¡produc8on ¡capacity ¡scaled ¡10-­‑fold ¡from ¡Phase ¡I ¡to ¡Phase ¡II ¡ Ø Process ¡is ¡robust, ¡reproducible ¡and ¡cost ¡effec8ve ¡ ¡ Ø 3-­‑year ¡shelf ¡life ¡as ¡a ¡freeze ¡dried ¡product ¡ ¡ 7

Characteriza:on ¡of ¡CYT-­‑6091 ¡ PEG-­‑THIOL TNF ¡ TNF ¡TARGETING ¡ THERAPEUTIC ¡ LIGAND ¡ Water ¡absorbed ¡by ¡ PEG-­‑Thiol ¡shields ¡ nanopar8cle ¡from ¡ immune ¡detec8on 8 ¡

Condi:ons ¡To ¡Release ¡Gold-­‑Bound ¡TNF ¡ Treatment ¡ Percent ¡Bound ¡ Percent ¡Released ¡ Buffer ¡ 99.0% ¡ 1.0% ¡ PBS ¡+ ¡1% ¡Tween ¡20 ¡ 98.6% ¡ 1.4% ¡ 3M ¡MgCl 2 ¡ 91.0% ¡ 9.0% ¡ 10 ¡µg/ml ¡DTT ¡ 12.0% ¡ 88.0% ¡ 9 ¡

Analy:cal ¡Tests ¡of ¡GMP ¡Manufactured ¡CYT-­‑6091 Gold ¡Analysis ¡ ¡ TNF ¡Analysis ¡ ¡ PEG ¡Analysis ¡ ¡ Surface ¡Charge ¡Analysis ¡ 10 ¡

Analy:cal ¡Tests ¡of ¡GMP ¡Manufactured ¡CYT-­‑6091 ¡ Gold ¡Analysis ¡ Ø Size ¡analysis ¡by: ¡ ¡ • UV ¡spectroscopy ¡ • Differen8al ¡sedimenta8on ¡by ¡centrifuga8on ¡(disc ¡gradient ¡ centrifuga8on) ¡ Ø Quan8ta8ve ¡analysis ¡by ¡ICP-­‑AES ¡ 11 ¡

Analy:cal ¡Tests ¡of ¡GMP ¡Manufactured ¡CYT-­‑6091 ¡ TNF ¡Analysis ¡ Ø Quan8ta8ve ¡analysis ¡by ¡ELISA ¡ • Total ¡vs. ¡Free ¡ Ø Purity ¡by ¡HPLC ¡-­‑ ¡following ¡stripping ¡by ¡DTT ¡ Ø Potency ¡by ¡bioassay ¡-­‑ ¡of ¡final ¡drug ¡product ¡ 12 ¡

Analy:cal ¡Tests ¡of ¡GMP ¡Manufactured ¡CYT-­‑6091 ¡ PEG ¡Analysis ¡ Ø Quan8ta8ve ¡analysis ¡by ¡RP-­‑HPLC-­‑ELSD ¡ • Total ¡vs. ¡Bound ¡(following ¡stripping ¡by ¡DTT ¡of ¡both ¡samples) ¡ ¡ ¡ 13 ¡

Analy:cal ¡Tests ¡of ¡GMP ¡Manufactured ¡CYT-­‑6091 ¡ Surface ¡Charge ¡Analysis ¡ ¡ Ø Measured ¡by ¡Zeta ¡Poten8al ¡ 14 ¡