Characterizing ¡Protease ¡Ac1vity ¡ and ¡Selec1vity ¡ Advisor: ¡ Patrick ¡Daugherty ¡ Graduate ¡Mentor: ¡ Jennifer ¡Guerrero ¡ Department: ¡ Chemical ¡Engineering ¡ ¡ Interns: ¡ Anthony ¡Prieto, ¡Brian ¡Novoa, ¡ Charles ¡Yuhas, ¡and ¡Mohammad ¡Ali ¡
Metastasis ¡is ¡when ¡cancer ¡ Primary ¡Tumor ¡ spreads ¡from ¡the ¡primary ¡ tumor ¡to ¡secondary ¡ loca1ons. ¡ ¡ Normal ¡Cells ¡ hHp://www.cancerresearchuk.org/ ¡
Protease ¡ Healthy ¡Cells ¡ Cell ¡Adhesion ¡ ¡ Substrates ¡ Cancer ¡Cells ¡
Cleavage ¡ Binding ¡ Substrate ¡ hK7 ¡ S1-‑FibronecCn ¡ S2-‑Desmocollin-‑1 ¡ S3-‑Desmoglein-‑1 ¡ S4-‑Desmoglein-‑2 ¡ S5-‑E-‑cadherin ¡
FRET: ¡Forster ¡Resonance ¡Energy ¡Transfer ¡ hK7 ¡ Cyan: ¡Cleavage ¡ + ¡ Substrate ¡ 408 ¡nm ¡ Yellow: ¡No ¡Cleavage ¡
Promoter ¡ Promoter ¡ Substrate ¡ hK7 ¡ Yeast ¡Cell ¡ Bacteria ¡ cell ¡ hHp://web.uvic.ca/~raad/Research.html ¡ + Isolated ¡Substrate ¡ Isolated ¡hK7 ¡ hHp://en.wikipedia.org/wiki/KLK7 ¡
S1-‑FibronecCn ¡ S2-‑Desmocollin-‑1 ¡ S3-‑Desmoglein-‑1 ¡ 100 ¡ S4-‑Desmoglein-‑2 ¡ Percent ¡of ¡Substrate ¡Cut ¡ S5-‑E-‑cadherin ¡ 75 ¡ 50 ¡ 25 ¡ 0 ¡ S1 ¡ S2 ¡ S3 ¡ S4 ¡ S5 ¡ Nega1ve ¡ Control ¡
S1-‑FibronecCn ¡ S2-‑Desmocollin-‑1 ¡ S3-‑Desmoglein-‑1 ¡ 100 ¡ S4-‑Desmoglein-‑2 ¡ Percent ¡of ¡Substrate ¡Cut ¡ S5-‑E-‑cadherin ¡ 75 ¡ 50 ¡ 25 ¡ 0 ¡ S1 ¡ S2 ¡ S3 ¡ S4 ¡ S5 ¡ Nega1ve ¡ Control ¡
Inhibitor ¡ Permanent ¡Binding ¡ Substrate ¡
100 ¡ Percent ¡of ¡Substrate ¡Cut ¡ 75 ¡ 50 ¡ 25 ¡ 0 ¡ S1 ¡ S2 ¡ S3 ¡ S3 ¡+ ¡ S4 ¡ S5 ¡ Nega1ve ¡ Inhibitor ¡ Control ¡
Substrates ¡S2, ¡Desmocollin-‑1, ¡and ¡S3, ¡Desmoglein-‑1, ¡were ¡ ¡ cleaved ¡the ¡fastest ¡by ¡hK7. ¡ ¡ Protease ¡ Healthy ¡Cells ¡ Cell ¡Adhesion ¡ ¡ Substrates ¡ Cancer ¡Cells ¡
Inhibitor ¡ Protease ¡ Healthy ¡Cells ¡ Cell ¡Adhesion ¡ ¡ Substrates ¡ Cancer ¡Cells ¡
Advisor: ¡ Patrick ¡Daugherty ¡ Graduate ¡Mentor: ¡ Jennifer ¡Guerrero ¡ Program ¡Advisors: ¡Maria ¡Napoli, ¡Jens ¡Kuhn, ¡and ¡Chrysafis ¡Andreau ¡ RAs: ¡ Sarah ¡Maxel, ¡Kori ¡Lay, ¡Spencer ¡Igram, ¡and ¡Stephanie ¡Mendes ¡ ¡ ¡ ¡
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